Coombsův test

Co je Coombsův test?

Coombsův test se používá k detekci protilátek proti červeným krvinkám (erytrocytům). K určení protilátek se používá tzv. Coombsovo sérum, které se získává ze séra králíků a senzibilizuje na lidské protilátky.
Test se používá v případě hemolytické anémie, inkompatibility rhesus nebo krátce před podezřením na krevní transfuzi. Hemolytická anémie je forma anémie a inkompatibilita rhesus popisuje nekompatibilitu krevních skupin.
Existují dva různé typy Coombsova testu, přímý a nepřímý test se liší indikací a provedením.

Důvody Coombsova testu

Pokud existuje podezření na hemolytickou anémii, použije se přímý Coombsův test. Hemolytická anémie popisuje anémii, při které se před poškozením krevní buňky předčasně rozkládají.
U autoimunitních onemocnění, jako je systémový lupus erythematodes, revmatoidní artritida nebo chronická lymfatická leukémie, se vytvářejí protilátky, které jsou namířeny proti vlastním krevním buňkám těla (tzv. Erytrocyty). Vazba protilátek vede k časnému rozkladu krevních buněk nebo ke shlukování krvinek v cévách. Obě tyto vedou ke snížení hodnoty hemoglobinu.

Další indikací pro přímý Coombsův test je haemolyticus neonatorum, zde se v těle matek negativních na rhesus vytvářejí protilátky proti faktoru rhesus. Pokud je nenarozené dítě pozitivní na rhesus, mohou protilátky z mateřského proniknout do oběhu plodu a tam zahájit zvýšené odbourávání krvinek. Novorozenci vynikají těžkou anémií a žloutenkou.

Coombsův test se pravidelně používá v transfuzní medicíně. Používá se ke stanovení krevních skupin před krevní transfuzí (noční test), ve kterém je malý vzorek krve smíchán s různými séry z krevních skupin A, B, AB a 0. Pokud krev zůstává tekutá, krev pacienta je kompatibilní s odpovídající krevní skupinou. Může být provedena transfúze.

Nepřímý Coombsův test lze také použít k hledání volných protilátek v těle pacienta (test pro vyhledávání protilátek), např. během prohlídek v mateřství, při přípravě na transfuzi pro onkologické pacienty nebo osoby, které již transfuzi krve dostaly.

Zde naleznete vše o tomto tématu: Intolerance Rh.

Příprava

Při přípravě na Coombsův test se nejprve připraví séra s protilátkami, které mají být testovány. Plní se do různých zkumavek nebo se aplikují na testovací karty.

V každodenní klinické praxi, např. při nočním testu jsou již připraveny testovací karty, které lze okamžitě použít. Poté se pacientovi odebere krev a připraví se na test. V závislosti na tom, jaký typ Coombsova testu se provádí, je zapotřebí krevních buněk nebo séra (tekutá část krve) pacienta.

Sekvence

Pokud se provádí přímý Coombsův test, červené krvinky se odfiltrují z krve pacienta. Je třeba vyzkoušet, zda na nich jsou protilátky typu IgG, které způsobují hemolytickou anémii nebo inkompatibilitu krevních skupin v těle. Sérum Coombs obsahuje protilátky proti lidským protilátkám IgG. Směs se zahřívá (inkubuje) po dlouhou dobu. Pokud jsou na červených krvinkách protilátky, shlukují se a test je pozitivní.

Nepřímý Coombsův test se skládá ze dvou částí. Cílem je stanovit protilátky, které jsou volné v krvi a nejsou vázány na krvinky.
Tentokrát se tekutá část (sérum) filtruje z krve pacienta. Nejprve se do testu přidají červené krvinky. Pokud jsou v séru volné protilátky, vážou se na červené krvinky. Tato reakce není viditelná. Pouze ve druhém kroku, stejně jako v přímém Coombsově testu, se přidá a zahřeje sérum Coombs s protilátkami proti lidským protilátkám. Také zde se shlukne, pokud je výsledek pozitivní.

Hodnocení

Pokud jsou protilátky kombinovány s vhodným Coomsovým sérem, vážou se protilátky v séru (tekutá část krve) s protilátkami pacienta. Protilátky jsou ve tvaru Y, což znamená, že mohou vždy vázat dva vazebné partnery, a tak navzájem zesíťovat červené krvinky. Vzniká velká akumulace krevních buněk. Tyto shluky se stanou viditelnými - krevní shluky (shluky) a test je pozitivní.
Pokud pacient nemá vhodné protilátky, sérum zůstává kapalné. Nevidíte žádnou změnu - test je negativní.

Jaké jsou alternativy?

Alternativou k Coombsovu testu je imunologická metoda ELISA (enzymatický imunosorbentový test), ve které jsou určité protilátky označeny enzymem. Tato protilátka se přidá do testovaného roztoku. Pokud značené protilátky reagují s protilátkami v testovaném roztoku, navázaný enzym se aktivuje a vytvoří barvivo. Odpovídající zkumavky mění barvu - test je pozitivní.

Kromě postupu ELISA existuje také blot WESTERN, který se často používá jako potvrzovací test pro pozitivní ELISA.